Lo primero es construir un capilar por el procedimiento indicado en una entrada anterior; se le va a colocar una camisa para enfriamiento con agua y para comenzar, hacer pruebas de movilidad de iones con soluciones buffer-LSNa para que estas sean arrastradas por el flujo electro forético. El flujo electroforético, puede variar dependiendo del pH y de la concentración de detergente aniónico (Laurilsulfato de Na) e incluso invertirse utilizando detergentes catiónicos.
Para poder apreciar el FEF es necesario que la muestra sea coloreada, tener un detector, o que se pueda ver gotear la solución por un extremo del capilar. Si se quiere ver gotear la solución, habría que hacer un “pozo” con buffer, el cátodo del alto voltaje y una salida del capilar ( Fig. adjunta).
El problema con esta última opción es que se generan burbujas de gas dentro del capilar. Para evitar las burbujas, se fractura el capilar, se medio pegan los dos pedazos y se rodea por una membrana con baja resistencia (celofán), de manera de hacerle un escape a la corriente, pero no a la solución.
El detector que vamos a construir es el externo de alta frecuencia ( 200 MHz). Tiene la ventaja de que es sencillo, está aislado del alto voltaje, no toca la solución y además es muy sensible. Ya dimos algunos detalles en la entrada del 2008.
Voy a utilizar como fuente de poder la de 400 V y ver como se comportan las soluciones bajo las condiciones anteriores. Luego utilizaré la fuente de alto voltaje con la bobina de carro, el flayback y finalmente se utilizará un doblador de voltaje con el que espero lograr un voltaje de unos 20 kV. La ventaja del alto voltaje es doble: en primer lugar, aumenta la resolución de los “picos” y en segundo lugar, la corriente que circula se hace menor, así, si duplicamos el voltaje, por conservación de la energía, la corriente disminuye a la mitad, lo cual evita el calentamiento del buffer dentro del capilar. Para minimizar el calentamiento del capilar, le colocamos una camisa por la que circula agua que cae por gravedad desde un frasco de “sueros”.
Quedaría por construir el sistema para cargar la muestra, pero eso es más adelante, según los resultados a obtener. Inicialmente se vaciará una de las copas y se llena con la muestra. Se lava bien la copa con agua destilada y a continuación se llena con el buffer a utilizar.
Caracas 14 de noviembre del 2010.
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